临床医学专业神经解剖学线上线下混合式教学实践研究

摘  要：目的：比较两种品牌采血管对6种精神科药物(阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、艾司西酞普兰、奥氮平、喹硫平及度洛西汀)的血药浓度测定结果。方法：在门诊患者中随机选取做不同药物浓度检测的患者，清晨未服药状态下用两种品牌含分离胶及促凝剂的采血管采集静脉血，每种药品采集8例，采用高效液相色谱-质谱联用法进行血药浓度测定。结果：两种采血管检测阿立哌唑、脱氢阿立哌唑及喹硫平的血药浓度测定值比较，差异有统计学意义(P<0.05)；检测艾司西酞普兰、奥氮平及度洛西汀的血药浓度比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：两种品牌采血管对不同药物的血药浓度测定结果存在影响，建议在进行药物浓度检测前做好采血管比对分析，选取适宜的采血管。

关键词：采血管 血药浓度 测定结果影响

阿立哌唑及其代谢物脱氢阿立哌唑、艾司西酞普兰、奥氮平、喹硫平及度洛西汀是临床上常用的6种精神科治疗药物。一般精神科药物都需要长期服用，患者的服药依存性差，其药动学上的个体差异明显，同时血药浓度与疗效和不良反应密切相关[1-2]。因此，准确检测患者体内的药物浓度，并调整血药浓度在治疗参考范围内，对于患者的诊疗和康复是必要的。高效液相色谱-质谱联用仪是将液相色谱仪与质谱仪通过一定接口耦合到一起的分析仪器。样品通过液相色谱仪分离后的各个组分依次进入质谱检测器进行检测。通过对质谱图的分析处理，得到样品的定性、定量结果。液质联用法检测血药浓度主要是通过分析血浆或血清中的相关化合物的分子离子峰进行准确定量。但是，不同品牌的采血管可能会加入不同的物质，会出现影响化合物定量检测的问题。本文主要对两种不同品牌采血管的6种血药浓度检测是否存在差异性进行了研究，现报告如下。

资料与方法

仪器与试剂：采血管A(5 m L分离胶+促凝剂管)；采血管B(5 m L分离胶+促凝剂管)；高速冷冻离心机(型号3H16R1)；高效液相色谱-质谱联用(型号TQS)；旋涡混合器(型号Vortex-Genie 2)；高端超纯水系统(型号ALH-6000-U)，标准曲线及质控品均为杭州某医疗器械有限公司提供。

色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC C18柱(2.1×50 mm,1.7μm)，柱温为50℃，流动相为0.1%的甲酸甲醇和0.1%甲酸水，按梯度程序洗脱，流速为0.5 m L/min，进样量2μL。

质谱条件：电喷雾离子源(ESI)(+)为3.00 k V，毛细管温度500℃，离子传输管温度为150℃，鞘气流速为150 L/HR，辅助气流速为0.15 m L/min，扫描模式为Full MS，采集质量范围为150.0～500.0 m/z。

标本采集：患者均为前日夜间服用最后1次药，至清晨采血时间隔8～10 h，且采血前未饮食。给患者扎上止血带，对穿刺部位的皮肤进行常规消毒，待消毒液干燥后对患者进行静脉穿刺，插上负压采血管之后立即解开止血带，血液会利用压差的原理自动流进负压管当中，达到需要量之后血液会停止变化。受试者使用A采血管和B采血管各采1管血。采集完成后退出试管，轻轻颠倒混匀6～8次，让血液和抗凝剂达到充分混合的状态。采集到标本之后放置15 min待血液凝固，按要求离心后送到质谱室进行样品前处理。

样品前处理：吸取100μL血清于1.5 m L离心管中，加入400μL的内标溶液，涡旋混匀5 min,4℃15 000 r/min离心10 min。吸取上清液300μL,4℃15 000 r/min离心10 min。再吸取上清液100μL加入96孔板中，即得待测样品。

统计学方法：数据用Microsoft excel2007软件进行统计分析，计量资料用(±s)表示，各管间进行一致性比较，采用直线相关与回归分析，对统计参数直线相关与回归系数(r)、总体截距(a)与总体斜率(b)进行t检验分析，P<0.05为差异有统计学意义。

结果

按照上述检测方法进行数据处理及分析：8例患者两种采血管的检测结果显示，A、B两种采血管测定结果阿立哌唑、脱氢阿立哌唑及喹硫平有极显著性差异，差异有统计学意义(P<0.01)；艾司西酞普兰、奥氮平及度洛西汀比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

讨论

能正确采集及处理标本，是整个实验过程质量控制当中最重要的环节，采集血液标本、分离血清，在临床检测分析中尤为必要[3-4]。目前分离胶试管已经广泛应用到临床生化、免疫、药物浓度分析项目的测定中。肝素锂抗凝管能快速分离血浆，能用在急诊生化检验中，而分离胶试管当中的胶体本身和促凝剂，肝素锂抗凝管中的肝素锂是否会对检测结果造成影响，还需要进一步观察与验证[5]。对于不同种类的采血管是否会影响到生化检测结果，目前已有部分文献进行了研究，血浆中视黄醇结合蛋白、前白蛋白、β2-微球蛋白、同型半胱氨酸、游离脂肪酸以及肌酸激酶等项目在生化分析仪上有了更多的应用，然而采血管对于这些项目的影响则较少[6-7]。

采集和分离血液标本，在临床化学检验当中发挥了重要的作用。就当前临床实践情况来看，各种商品化的采血管已经广泛应用于临床当中[8-11]。从类型上来看，分离胶采血管的优点体现在分离血清速度快、容易保存等；肝素锂抗凝管通常应用到急诊生化检验当中，能及时分离开血浆，在常规急诊生化项目检测中应用普遍[12-14]。由于不同品牌以及不同类型的采血管当中添加的促凝剂、分离胶和抗凝剂都有很大的差异化，因此在临床生化检测中都会产生影响。不同品牌的采血管可能会加入不同的物质，会出现影响化合物定量检测的问题。当前有很多文献都分析了采血管对生化项目及免疫项目检测的影响[15-17]，然而对血药浓度方面的研究则较少。

不同抗凝剂的添加工艺都会对检测结果造成影响，而一般在抗凝真空采血管的添加物中，除了EDTA-K2之外，还会再加入一些添加剂涂在采血管的内壁当中，防止血液在采集过程中挂壁的情况，方便让血液更加通畅流入到采血管中，减少溶血。然而在最近几年的研究中发现，添加表面活性剂之后，常常会对检验结果产生影响。

本研究发现，在相同实验条件下，A、B两种采血管对艾司西酞普兰、奥氮平及度洛西汀药物浓度检测比较，差异无统计学意义(P>0.05)；对阿立哌唑、脱氢阿立哌唑及喹硫平的血药浓度水平检测比较，差异有统计学意义(P<0.01)；这可能是由于两种采血管中添加的分离胶或促凝胶成分不同所致。A管为本实验室质谱方法学开发单位推荐用管，日常的室内质控较稳定，参加室间质评成绩均合格。通过与临床沟通，结合《AGNP精神科治疗药物监测共识指南(2011版)》中“剂量相关参考浓度范围”，A管的检验结果与临床用药量更相符，本实验室确认选择结果准确性更高的A管。

综上讨论，在实际临床检测中，要注意到检测项目的定标以及室内质控要求外，还要按照美国病理家学会的要求，比对好真空采血管的质量和适应性，建议实验室在采用液相色谱-质谱法进行血药浓度检测前，需对所使用的采血管进行验证，保障所选择的真空采血管完全合适，以保证检测结果的准确性。

参考文献

[1]陈晨,董倩楠,王琳,等.液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中奥美拉唑及其代谢物奥美拉唑砜的质量浓度[J].沈阳药科大学学报,2020,37(6):518-526.

[2]胡雪岩,程丹丹,侯媛媛,等.基于UPLC-Q/TOF-MS技术的治咳川贝枇杷滴丸在家兔体内的定性定量研究[J].药物评价研究,2019,42(1):103-108.

[3]李莎,伍洋科,颜笑,等.应用Westgard多规则理论评估万古霉素血药浓度监测的室内质控[J].中国医院药学杂志,2018,38(23):2425-2428.

[4]褚利娟,甘慧,高月,等.LC-MS/MS法测定人血浆中抗辐射新药E0703和代谢物E0703-tone的质量浓度及药动学研究[J].沈阳药科大学学报,2018,35(9):763-768.

[5]秦小江,侯晓敏,张坤,等.血液中6种苯系物吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱串联法测定[J].中国公共卫生,2018,34(6):926-929.

[6]张晓旭,侯林中,姜晖,等.新型冠状病毒灭活方式对高效液相色谱法监测万古霉素血药浓度的影响[J].中国药业,2020,29(9):27-29.

[7]赵博欣,刘思佳,刘媛,等.血液标本灭活处理对液相串联质谱法伏立康唑治疗药物监测的影响及其在COVID-19疫情期间的应用[J].南方医科大学学报,2020,40(3):342-345.

[8]周严严,顾欣如,李涛,等.蒲地蓝消炎口服液活性成分在大鼠体内的药代动力学过程及对肝脏药物代谢酶的影响[J].中国中药杂志,2019,44(22):4932-4939.

[9]吴妍,张哲弢,史天陆,等.PCI术后患者PON1-126C>G基因多态性对氯吡格雷所致出血事件的影响研究[J].中国医院药学杂志,2018,38(11):1187-1191.

[10]龙子君,刘庆,李苏,等.纳米增强免疫比浊法和高效液相色谱法检测化疗患者5-氟尿嘧啶血药浓度的比较[J].江苏医药,2017,43(18):1306-1310.

[11]赵婷,于静,王婷婷,等.新疆癫痫患儿左乙拉西坦稳态血药浓度影响因素探讨及参考区间的初步建立研究[J].中国临床药理学杂志,2020,36(10):1208-1211.

[12]吴菁,高申苗.伏立康唑血药浓度监测对侵袭性肺部真菌感染患者的影响[J].河南医学研究,2020,29(14):2586-2588.

[13]师亚玲,方志远,李茁,等.万古霉素首次监测与个体化给药后血药浓度未达标的影响因素分析[J].中国药师,2020,23(2):307-310.

[14]陈宏镇,谢焕山,陈超端,等.基于治疗药物监测的丙戊酸钠缓释片血药浓度影响因素分析[J].中国临床药理学杂志,2020,36(10):1216-1219.

[15]薛盛敏,陆灏迪,唐莲,等.群体药代动力学软件对万古霉素稳态谷浓度的预测能力分析[J].中华危重病急救医学,2020,32(1):50-55.

[16]魏菁菁,王冬梅,胡俊,等.肾移植术后患者血液他克莫司代谢率(C0/D值)对肝肾功能的影响研究[J].现代检验医学杂志,2020,35(3):112-115.

[17]张文龙,姜美婷,刘艳,等.冠心宁注射液对大鼠体内华法林抗凝作用的影响及机制[J].实用药物与临床,2020,23(7):577-583.